ในที่นี้ขอยกตัวอย่างเครื่องของ HORIBA ABX 60 นะครับ
หลักการเครื่องตรวจนับเม็ดเลือด PENTRA 60
เครื่องจะมีระบบดูดเลือด (Whole Blood ) โดยอัตโนมัติ แล้วนำไปผสมกับน้ำยาชนิดต่างๆ ในแต่ละ chamber จากนั้นจึงนำไปผ่านขั้นตอนการนับ โดยมีหลักการต่างๆ ดังนี้
1. Impedance เป็นหลักการที่ใช้ตรวจนับRBC และPLT
เมื่อเลือดถูกดูดเข้ามาที่ RBC chamber และผสมกับน้ำยา ABX Diluent แล้ว RBC และ PLT จะถูกส่งผ่าน aperture ที่มีขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางของรูเท่ากับ 50 mm. ถัดจาก aperture จะมี electrode 2 ขั้ว ที่ผลิตกระแสไฟฟ้าคงที่ไหลผ่าน และเมื่อ cell ที่มีขนาดต่างๆกันผ่านจะทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงทางแรงดัน pluse amplitude ขึ้น โดยจะมีขนาดแปรผันตามขนาดของ cell ซึ่งจะทำให้เกิดความแตกต่างของระดับกลุ่ม pluse ของ RBC และกลุ่ม pluse ของ PLT เนื่องจากขนาดที่ต่างกัน ขณะที่จำนวน pluse จะแปรผันตามจำนวนของ cell ดังแสดงตามรูป
รูป แสดงการตรวจหาปริมาณ RBC และ PLT
2. การตรวจหาค่า Hemoglobin
Photometer เป็นหลักการหาความเข้มข้นของ HGB โดยเลือดจะถูกปล่อยลงในHGB chamber เมื่อผสมกับน้ำยา ABX Diluent และน้ำยา ABX Alphalyse ซึ่งมีคุณสมบัติทำให้ RBC สลาย ทำให้เกิดปฏิกิริยากับ hemoglobin ได้เป็นสารประกอบ Chromogenous Cyanmethemoglobin จากนั้นจะถูกวัดโดยหลักการ Spectro-photometry โดยใช้แสงที่มีความยาวคลื่น 550 nm. สำหรับ parameter อื่นๆ ได้จากการคำนวนโดยไมโครโปรเซสเซอร์
3. การตรวจหาปริมาณ BASO/ WBC
เลือดจะผสมกับน้ำยา ABX Diluent ใน BASO/WBC chamber แล้วจึงทำการวัด WBC โดยใช้หลักการ Impedance เช่นเดียวกับการนับ RBC และ PLT แต่ใช้ aperture ที่มีขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางของรูเท่ากับ 80 mm. หลังจากนั้นจึงมีการเติมน้ำยา ABX BasolyseII เพื่อทำปฏิกิริยาสลาย RBC และ Cell Mambrane ของWBC ทุกชนิด ยกเว้น Basophil ที่ยังสมบูรณ์อยู่ แล้วจึงผ่านขั้นตอนการนับ cell ใน aperture เช่นกัน ดังแสดงตามรูป
รูปแสดงการหาปริมาณ Basophil
4. การตรวจหาแยกชนิดของเม็ดขาว NON BASOPHLI
(Lymphocyte, Mononuclear, Neutrophil, Eosinophil )LMNE
เครื่องใช้หลักการในการหา เปอร์เซนต์ % แยกชนิดของเม็ดขาวแต่ละชนิด 3 หลักการ
1. Cytochemistry
เลือดจะผสมกับน้ำยา ABX Diluent ใน LMNE Chamber ตามด้วยน้ำยา ABX Eosinofix เพื่อทำปฏิกิริยาสลาย RBC Fix WBC โดย น้ำยา Eosinofix จะติดสีเฉพาะ nucleus ของแต่ละเซลเม็ดเลือดขาว
รูปแสดง การติดสี ของเม็ดเลือขาว
2. การแยกตามขนาดเม็ดเลือดขาว impedance
หลังจากนั้น WBC ทั้งหมดจะผ่านไปยัง cytometer เป็นแบบแถวตอนเรียงหนึ่งเพื่อทำการแยกชนิดของ WBC โดยใช้หลักการ impedance สำหรับหลักการ impedance จะใช้แยกขนาดของ LMNEตามขนาด ( primary focused flow for impedance measument )
รูป แสดงการแยกเม็ดเลือดขาวผ่าน CYTOMETER แยก ตามขนาด และการติดสี
3.การแยกเม็ดเลือดตามการติดสี Light Absorbance
เมื่อสามารถแยกขนาดของ LMNEทุกชนิดได้แล้ว LMNE จะถูกวัดค่าการดูดกลืนแสง และการกระจายแสง ซึ่ง cell แต่ละชนิดมีความแตกต่างกันขึ้นอยู่กับโครงสร้างภายในและคุณสมบัติการถูกย้อมสีทำให้สามารถแยก LMNE ได้
โดยการแยกเม็ดเลือดขาวโดยการติดสี Light Absorbance ตามแนวแกน Y
โดยการแยกเม็ดเลือดขาวโดยขนาด impedance ตามแนวแกน X
ไม่มีความคิดเห็น:
แสดงความคิดเห็น